A549、HT-29、CAL-27、MDA-MB-231細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)分享
影響影子：IF:16.6
發(fā)表期刊:Nature Communications
Doi: 10.1038/s41467-022-28213-y
原文標(biāo)題：Electron transfer-triggered imaging of EGFR signaling activity。
背景：生物過(guò)程中的能量轉(zhuǎn)移是通過(guò)電子和質(zhì)子的轉(zhuǎn)移來(lái)實(shí)現(xiàn)的,在腫瘤發(fā)展進(jìn)程中，與正常細(xì)胞相比，腫瘤細(xì)胞實(shí)現(xiàn)了極其活躍的電子轉(zhuǎn)移，以支持其增殖、分化和遷移。如果能夠通過(guò)監(jiān)測(cè)與腫瘤增殖相關(guān)信號(hào)通路的電子轉(zhuǎn)移，則有可能在此基礎(chǔ)上進(jìn)行治療干預(yù)。
方法：研究了用于電子轉(zhuǎn)移觸發(fā)成像的ETTE納米探針在腫瘤治療過(guò)程中的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。通過(guò)納米探針設(shè)計(jì)，免疫熒光，western蛋白印跡等方法探究了使用ETTEE納米探針作為顯像劑，在A549肺癌細(xì)胞中對(duì)EGFR信號(hào)通路活性進(jìn)行成像的效果。通過(guò)免疫組化，小鼠活體成像等方法并利用肺癌小鼠模型評(píng)估了ETTE納米探針在腫瘤治療過(guò)程中對(duì)EGFR信號(hào)通路活性的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)能力。
結(jié)果：我們?cè)O(shè)計(jì)的ETTE納米探針，通過(guò)使用二茂鐵-DNA聚合物鏈，在信號(hào)通路激活過(guò)程中將轉(zhuǎn)移的電子改變?yōu)楣庑盘?hào)，可以在時(shí)間和空間尺度上進(jìn)行活體成像。進(jìn)一步在A549細(xì)胞中使用ETTE納米探針對(duì)EGFR信號(hào)通路進(jìn)行成像驗(yàn)證了EGFR激活水平較高的細(xì)胞可以產(chǎn)生更強(qiáng)的信號(hào)，即在細(xì)胞水平上，EGFR相關(guān)信號(hào)通路的激活可以通過(guò)ETTE納米成像探針實(shí)現(xiàn)可視化?；谀[瘤治療過(guò)程中EGFR活性下降我們進(jìn)一步利用ETTE納米探針對(duì)腫瘤治療過(guò)程進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，結(jié)果顯示治療組腫瘤部位有更弱的信號(hào)。
結(jié)論：綜上所述，我們的研究表明，ETTE納米探針可以在腫瘤治療過(guò)程中實(shí)現(xiàn)對(duì)EGFR信號(hào)通路活性的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，并有望在后續(xù)的治療決策和預(yù)后中發(fā)揮關(guān)鍵作用。
文章引用：
Cell Culture
A549 cells: A549 cells derived from two different sources, American Type Culture Collection (ATCC) and China Center for Type Culture Collection (CCTCC). The A549 cells were maintained in DMEM high glucose (Gibco?, USA) with 10% fetal bovine serum (Zeta life, USA) and 1% penicillin/streptomycin (New Cell & Molecular Biotech, Co., Ltd).
HT-29 cells: HT-29 cells were derived from CCTCC. The HT-29 cells were maintained in DMEM high glucose (Gibco?, USA) with 10% fetal bovine serum (Zeta life, USA) and 1% penicillin/streptomycin (New Cell & Molecular Biotech, Co., Ltd).
CAL-27 cells: CAL-27 cells were derived from CCTCC. The CAL-27 cells were maintained in DMEM high glucose (Gibco?, USA) with 10% fetal bovine serum (Zeta life, USA) and 1% penicillin/streptomycin (New Cell & Molecular Biotech, Co., Ltd).
MDA-MB-231 cells: MDA-MB-231 cells were derived from CCTCC. The MDA-MB-231 cells were maintained in DMEM high glucose (Gibco?, USA) with 10% fetal bovine serum (Zeta life, USA).
文章培養(yǎng)細(xì)胞方法總結(jié)
A549、HT-29、CAL-27、MDA-MB-231細(xì)胞均使用ZETA life含有10%血清及1%青/鏈霉素的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，MDA-MB-231細(xì)胞使用含有10%血清的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。上述細(xì)胞正常培養(yǎng)后，提取細(xì)胞蛋白，通過(guò)Western blot檢測(cè)EGFR表達(dá)水平。同時(shí)，培養(yǎng)的A549細(xì)胞移植到小鼠體內(nèi)，并通過(guò)活體成像實(shí)時(shí)觀察腫瘤生長(zhǎng)情況。結(jié)果表明，使用ZETA life胎牛血清培養(yǎng)的A549細(xì)胞移植后，能夠形成穩(wěn)定的小鼠腫瘤模型。（備注：A549：人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；HT-29 ：人結(jié)腸癌細(xì)胞；CAL-27：人舌鱗癌細(xì)胞；MDA-MB-231：人乳腺癌細(xì)胞。）
引用產(chǎn)品
胎牛血清fetal bovine serum (Zeta life, USA) ；
熱門產(chǎn)品
Z7010FBS-500,胎牛血清（澳洲血源）；Z7181FBS-500,胎牛血清（烏拉圭血源）；Z7186FBS-500,胎牛血清（法國(guó)血源）；Z7185FBS-500,胎牛血清（巴西血源）；Z7187FBS-500,胎牛血清（墨西哥血源）；Z7180FBS-500,胎牛血清（超低內(nèi)毒素血清）；AD600150，Advanced DNA RNA 細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑；AV500150，小動(dòng)物活體轉(zhuǎn)染試劑Advanced DNA RNA；CE80100T，無(wú)血清細(xì)胞凍存液 Plus ZT10002-5ml，支原體去除試劑(MRA)
ZETA life FBS（胎牛血清）簡(jiǎn)介：
美國(guó)ZETA life公司成立于1989年，是國(guó)際無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM/F12主要完成人，有幾十年的胎牛血清、無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基、以及干細(xì)胞、免疫細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞等多種不同類型哺乳動(dòng)物細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)液生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)；ZETA life也是目前世界胎牛血清、無(wú)血清培養(yǎng)基最大的OEM供應(yīng)商之一；每批血清均有完整的血源證明文件、獸醫(yī)師檢驗(yàn)證明及品質(zhì)測(cè)試報(bào)告；ZETA life胎牛血清在100級(jí)的無(wú)菌間采用全自動(dòng)方式制造生產(chǎn)，具有良好的可再現(xiàn)性及可追溯性。
